Oocyte activation and preimplantation development of bovine embryos obtained by specific inhibition of cyclin-dependent kinases

The efficiency of bohemine and roscovitine in combination with ionomycin on parthenogenetic activation and initial embryonic development of bovine oocytes was studied. Two experiments were performed: in the first, different concentrations (0, 50, 75 or 100æM) and different exposure periods (2, 4 or 6 hours) to bohemine or roscovitine were tested for activation rates of in vitro matured (IVM) bovine oocytes, which were pre-exposed to ionomycin. The best treatments, 75µM bohemine and 50µM roscovitine, both for 6h, were used in the second experiment, in which IVM bovine oocytes were exposed to ionomycin, followed or not by bohemine or roscovitine treatment, and evaluated for nuclear status, activation rate and blastocyst development were assessed. The combined treatments (ionomycin + cyclin-dependent kinases inhibitors - CDKIs) showed better results for activation rates (77.3 percent) and initial embryonic development (35.2 percent) than the single ionomycin treatment (69.4 percent for activation and 21.9 percent for development); and also lead to a more uniform activation (nearly 90 percent single pronucleus development). The results showed that CDKIs improve the effects of ionomycin on parthenogenetic activation and blastocyst development in bovine oocytes and could help to achieve more efficient activation protocols, increasing the developmental competence of embryos obtained by reproductive biotechniques.

Realizaram-se dois experimentos para avaliar a eficiência da bohemina e roscovitina associadas à ionomicina para ativação partenogenética e desenvolvimento embrionário inicial de bovinos. No primeiro, foram testadas diferentes concentrações (0, 50, 75 ou 100æM) e diferentes tempos de exposição (2, 4 ou 6 horas) à bohemina ou à roscovitina na ativação de oócitos bovinos maturados in vitro (MIV) pré-expostos à ionomicina. Os melhores tratamentos, bohemina 75µM e roscovitina 50µM, ambos por seis horas, foram utilizados no segundo experimento, no qual oócitos bovinos MIV foram expostos à ionomicina seguido ou não pelo tratamento com inibidores específicos das quinases dependentes de ciclina (CDKI), e avaliados quanto à configuração nuclear, taxa de ativação e desenvolvimento até blastocisto. Os tratamentos combinados (ionomicina+CDKI) apresentaram melhor taxa de ativação (77,3 por cento) e desenvolvimento embrionário inicial (35,2 por cento) do que a ionomicina sozinha (69,4 por cento e 21,9 por cento, respectivamente), e também promoveram ativação mais uniforme (aproximadamente 90 por cento de formação de um pronúcleo). Estes resultados demonstram que os CDKIs potencializam o efeito da ionomicina na ativação e desenvolvimento embrionário inicial e podem auxiliar na obtenção de protocolos de ativação mais eficientes, aumentando a capacidade de desenvolvimento de embriões produzidos por meio de biotécnicas reprodutivas.

Influência do diâmetro e da fase folicular sobre a competência in vitro de oócitos obtidos de novilhas da raça Nelore / Influence of diameter and follicular fase on the in vitro competence of oocytes from Nelore heifers

Avaliou-se o efeito do diâmetro e da fase do desenvolvimento folicular sobre a competência de oócitos para a produção in vitro de embriões bovinos. A primeira onda folicular foi sincronizada com progestógeno por nove dias e 24 horas após a sua retirada aplicou-se LH. Os ovários foram recuperados 60h (G-60), 96h (G-96) e 108h (G-108) após a ovulação induzida pelo LH. Os folículos foram dissecados ou aspirados e medidos e os oócitos recuperados e submetidos à maturação, fecundação e cultivo in vitro. Os ovários do G-60 apresentaram mais oócitos viáveis (graus I, II e III) (96,6 por cento). A taxa de clivagem teve efeito significativo sobre o diâmetro folicular, sendo maior nos oócitos oriundos de folículos classe 3 (>7mm). Na taxa de produção de blastocisto observou-se interação diâmetro versus fase de desenvolvimento folicular. A taxa de produção de blastocisto foi maior em oócitos obtidos de folículos com diâmetros <5mm (classe 1) no G-60 (64,5 por cento), de 5-7mm (classe 2) no G-96 (33,3 por cento) e >7mm (classe 3) no G-108 (50 por cento). Conclui-se que o diâmetro e a fase de desenvolvimento folicular influenciam a competência oocitária para o desenvolvimento in vitro. Nos estádios iniciais da onda folicular a produção de blastocisto foi maior em oócitos de folículos pequenos; com o avanço da onda, a produção de blastocistos foi maior em oócitos obtidos de folículos maiores.

The effect of follicular phase and follicle diameter on in vitro production of bovine embryos was evaluated. Follicular wave was synchronized in Nelore heifers with a progestogen for nine days and LH was administered 24 hours after progestogen withdrawal. Ovaries were recovered 60h (G-60), 96 h (G-96), or 108 h (G-108) after LH treatment. Ovarian follicles were dissected or aspirated and measured before oocytes were recovered and submitted to in vitro maturation, fertilization, and culture. The G-60 ovaries presented more viable oocyte (degrees I, II and III) (96.6 percent). Cleavage rate was higher for oocytes from follicles 7mm in diameter (class 3). There was a follicular phase-by-follicle diameter interaction effect on blastocyst production rate. Blastocyst production rates were higher for oocytes from follicles 5mm in diameter (class 1) in the G-60 group (64.5 percent), from follicles 5-7mm (class 2) in the G-96 group (33.3 percent), and from follicles 7mm (class 3) in the G-108 group (50 percent). Both the phase of follicular development and the follicle diameter influenced oocyte competence and ability for development in vitro. At the initial stages of the follicular wave, blastocyst production was higher for oocytes from small follicles. However, as the follicular wave advances, blastocyst production increases for oocytes from larger follicles.

Testosterona e gonadotrofina coriônica humana estimulam a esteroidogênese em células da granulosa de folículo pré-ovulatório de égua? / Do testosterone and human chorionic gonadotropin stimulate steroidogenesis in granulosa cells of preovulatory follicle in mare?

Avaliou-se o papel da gonadotrofina coriônica humana (hCG) e da testosterona na produção de progesterona (P4) e 17ß-estradiol (E2) pelas células da granulosa cultivadas in vitro de folículo antral de égua. Os tratamentos usados foram: 1- controle (nenhum hormônio adicionado), 2- 1UI hCG (0,3µg/ml) e 3- 10UI hCG (3,0µg/ml). O tratamento com hCG foi realizado na presença ou não de testosterona (144ng/ml). O meio foi coletado e substituído com 0,25, 3, 6, 12, 24 e 144h de cultivo. As concentrações de P4 e E2 foram mensuradas por radioimunoensaio. Não se observou diferença entre os tratamentos 1 e 3 quanto à produção de P4 e E2; o tratamento 1 resultou em aumento da concentração de progesterona após 24h de cultura (P<0,01), mas somente em presença de testosterona. A concentração de estradiol aumentou em presença de testosterona, alcançando concentração máxima com 6h de cultura (P<0,01), e diminuiu gradativamente, até atingir a concentração observada com 0,25h de cultura. A adição de hCG não influenciou a síntese do estradiol. A testosterona desempenhou importante efeito estimulador na síntese/secreção doe E2 pelas células da granulosa e modulou a ação do hormônio luteinizante na diferenciação e luteinização das células da granulosa de folículo antral presumidamente pré-ovulatório de égua in vitro.

Activation of bovine oocytes by strontium combined or not with an electric pulse

O objetivo deste trabalho foi avaliar as taxas de ativaçäo e de clivagem de oócitos bovinos tratados com estrôncio (10mm de SrCl2), após maturaçäo in vitro por 27-28 horas. No experimento 1, os tratamentos foram: S4 - ativaçäo pelo estrôncio por 4 horas; S12 - ativaçäo pelo estrôncio por 12 horas; S30 - ativaçäo pelo estrôncio por 30 horas; e P - ativaçäo por pulso elétrico (3 pulsos de 1,0kv/cm). No experimento 2 os tratamentos foram: PS4 - ativaçäo combinada pelo pulso elétrico e pelo estrôncio por 4 horas; S4P - ativaçäo pelo estrôncio por 4 horas e pelo pulso elétrico; e PS30 - ativaçäo pelo pulso elétrico e pelo estrôncio por 30 horas. No experimento 1, todos os tratamentos apresentaram taxas similares de ativaçäo (83-90 por cento; P>0,05). Para clivagem, P foi melhor (53 por cento; P<0,05) do que todos os tratamentos com estrôncio (6 a 28 por cento). No experimento 2, o tratamento S4P apresentou melhor taxa de ativaçäo (88 por cento; P<0,05) do que PS4 e PS30 (60 e 68 por cento, respectivamente). Para clivagem, observou-se o mesmo padräo, S4P (65 por cento; P<0,05) e PS4 e PS30 (37 por cento e 44 por cento, respectivamente). Conclui-se que o estrôncio é capaz de ativar oócitos bovinos e sua combinaçäo com pulso elétrico näo melhora a ativaçäo. Este é o primeiro relato demonstrando que o estrôncio ativa oócitos bovinos.

Simulación mediante el método de los elementos finitos del alendronato en un modelo de remodelado óseo basado en mecánica de daño / Simulation through the method of finite element of alendronate in a model of bone remodeling based on damage mechanics

El hueso, como tejido vivo, es capaz de adaptarse a las alteraciones de cargas a las que se le somete en nuestra vida cotidiana; sin embargo, este fenómeno de remodelación ósea es afectado igualmente por cambios hormonales o por ciertos medicamentos. Al estudiar los reemplazos articulares es fundamental el estudio del remodelado óseo, y debe considerarse además que gran parte de la población a la que se le colocan implantes son personas mayores con un estado osteopenico o nclusive con osteoporosis. El alendronato es un medicamento ampliamente utilizado hoy en día para incrementar la cantidad de mineral óseo en pacientes con las condiciones antes mencionadas. Este trabajo utiliza un modelo de remodelado óseo que se basa en la Mecánica de Daño y que considera a la porosidad ósea como la variable de daño. El planteamiento biológico se acopla al mecánico simulando tanto los cambios en el grado de mineralización del tejido óseo, como la disminución de la frecuencia de activación de las BMUs (unidades estructurales óseas - bone multicellular units)inducidos por el alendronato. Los efectos de estos cambios biológicos se representan directamente en la ley de evolución temporal deldaño. Los resultados obtenidos en simulaciones de uno y dos años de tratamiento muestran una buena correlación respecto a los datos clínicos obtenidos en la literatura.

Effect on insulin-like growth factor-1 during in vitro oocyte maturation and in vitro culture of bovine embryos

Avaliaram-se o efeito do IGF-I na maturaçäo in vitro (MIV) (experimento I) e no desenvolvimento embrionário (DE) (experimento II) de oócitos bovinos fecundados in vitro, quanto às taxas de clivagem (TC), de blastocistos (TB) e de eclosäo(TE). Para MIV, complexos cumulus-oócitos imaturos foram cultivados em meio TCM-199 suplementado com HEPES, bicarbonato e piruvato de sódio, aditivos, soro fetal bovino (meio B-199) e gonadotrofinas 14U/ml de PMSG e 7U/ml de hCG. Para o desenvolvimento embrionário, os oócitos/zigotos foram cultivados em meio B-199 com células epiteliais do oviduto bovino em suspensäo sob óleo de silicone. As condiçöes de cultivo in vitro para ambos os experimentos seguiram os tratamentos: 1- meio B-199 + 200 ng/ml IGF-I; 2- B-199 + 100 ng/ml IGF-I; 3- B-199 + 50 ng/ml IGF-I; 4- B-199 + 10 ng/ml IGF-I; 5- B-199 + 0 ng/ml IGF-I. Todas as culturas foram realizadas a 38,5§C em atmosfera com 5(porcento) de CO2 e os dados foram analisados pelo teste do qui-quadrado. No experimento I, näo houve diferença (P>0,05) entre os tratamentos quanto às TC, TB e TE, quanto ao meio de MIV foi suplemento com IGF-I. No experimento II, a adiçäo de IGF-I ao meio de DE resultou em aumento na TC (P<0,05) mas näo influenciou a TB e a TE. A adiçäo de 200 ng/ml de IGF-I ao meio DE melhorou a TC (71,1(porcento)) quando comparada com a TC dos grupos de 100 ng/ml de IGF-I (57,6(porcento)) ou controle (56,7(porcento)), entretanto näo houve diferença quando comparada com a dos grupos de 50 ng/ml (69,4(porcento)) ou 10 ng/ml (73,1(porcento)) de IGF-I. Näo houve efeito benéfico na adiçäo de 10 a 200 ng/ml de IGF-I nos meios de MIV e de DE com relaçäo ao desenvolvimento de embriöes produzidos a partir de oócitos maturados e fecundados in vitro

Odontodisplasia regional: un caso en el maxilar inferior / Regional odontodysplasia: a case in the lower jaw

La odontodisplasia regional es una rara anomalía dentaria de desarrollo sobre la cual hay solamente alrededor de 100 casos publicados. Clínicamente se presenta como dientes pequeños de color y forma atípicos. Radiográficamente aparece como un "diente fantasma". Se presenta un paciente de sexo masculino de 24 años de edad, con piezas retenidas en el maxilar inferior. Se evalúa su historia clínica y se presenta el tratamiento

El implante coclear en la sordera de larga evolución / Cochlear implant in long evolution deafness

En Colombia un número significativo de pacientes con sorderas neurosensoriales de larga evolución (congénitas o adquiridas en el primer año de vida ) son potenciales candidatos para el implante coclear, como una alternativa de rehabilitación en su vida cotidiana. Se ha reportado ampliamente en la literatura que los beneficios del implante coclear son restringidos en éste grupo de individuos y que los ciriterios de selección deben ser muy estrictos, especialmente en países con recursos limitados. Sin duda alguna el implante coclear mejora la comunicación y las habilidades auditivas en las sorderas prelinguales en diverso grado. Aún algunos pacientes alcanzan diferencias estadísticamente significativas en las pruebas de contexto abierto. En el presente artículo presentamos los resultados de la investigación donde se analizan los datos en los pacientes prelinguales con sorderas de larga evolución y las variables que afectan las diferencias observadas. De un total de 117 pacientes seleccionamos 31 pacientes prelinguales con una deprivación auditiva mayor de 12 años. Luego de analizar resultados se observa una mejoría estadísticamente significativa en las pruebas de prosodia y contexto cerrado. Las mayores diferencias se observan en los resultados de contexto abierto y luego de una análisis estadístico univariable y multivariable se concluye que los factores más importantes que influyen en mejores resultados son el uso consistente de audífonos, el tipo de rehabilitación, la rehabilitación continua luego del implante y una adecuada motivación a la comunicación oral. Estos aspectos son fundamentales para decidir los beneficios o limitaciones del implante coclear en éste grupo de pacientes

Avaliaçäo das condiçöes de maturaçäo oocitária e do efeito do reprodutor na produçäo in vitro de embriöes bovinos / Evaluation of oocyte maturation conditions and bull effect on the in vitro bovine embryo production

Avaliaram-se as condiçöes de cultura para maturaçäo dos oócitos (Exp. I) e o efeito do reprodutor (Exp. II) sobre as taxas de clivagem (TC) e de mórulas e blastocistos (MO/BL) produzidos in vitro. Oócitos imaturos foram submetidos a maturaçäo in vitro sob diferentes condiçöes: meio B-199, acrescido de 5 por cento de soro de vaca em estro (SVE), 5 por cento de soro fetal bovino (SFB) e células da granulosa (T1 subscrito/Exp. I) ou meio B-199, acrescido de 10 por cento de SFB, 14 UI/ml de PMSG e 7 UI/ml de hCG (T2 subscrito/Exp I). Após 24 h de cultura, os oócitos maturos foram inseminados com sêmen descongelado de dois reprodutores (R1 subscrito e R2 subscrito/Exp. II) e, após 48 h de incubaçäo, os embriöes de 2 e 4 células foram transferidos para placas de cultivo in vitro, onde permaneceram em cultura por mais 9 dias. No Exp. I, os oócitos de T1 subscrito e T2 subscrito foram inseminados com sêmen do R1 subscrito/Exp. II. No Exp. II, os oócitos do T1 subscrito/Exp. I foram inseminados com sêmen de R1 subscrito e R2 subscrito/Exp. II. No Exp. I, a TC foi superior (p<0,0l) para T2 subscrito, quando comparado com T1 subscrito. A produçäo de MO/BL näo foi diferente (p>0,05) entre tratamentos. No Exp. II, a TC e a taxa de MO/BL diferiram (p<0,05) para cada reprodutor. A adiçäo de hormônios no meio de maturaçäo, embora näo tenha interferido na produçäo de embriöes, parece ser um procedimento mais prático que o uso de células da granulosa. A utilizaçäo de sêmen de diferentes reprodutores afetou o subseqüente desenvolvimento embrionário in vitro

The effect of serum on in vitro maturation, in vitro fertilization and steroidogenesis of bovine oocytes co-cultured with granulosa cells

The influence of fetal calf serum alone (fcs) or associated with proestrous (FCS + PCS), ESTROUS (FCS + ECS) or metaestrous (FCS + MCS) cow serum added to the culture medium and of the steroids produced by co-cultured granulosa cells were evaluated in terms of the in vitro maturation (IVM) and fertilization (IVF) of bovine oocytes. Supplementation of the medium with 9FCS + ECS and FCS + MCS resulted in higher proportions of oocytes that reached metaphase II (96.0 per cent and 93.3 per cent, respectively) and in higher proportion of embryos that reached the four- and eight-cell/morula stages (51.9 per cent and 65.6 per cent, respectively), whereas the supplementation with FCS and FCS + pcs resulted in only 79.2 per cent and 67.5 per cent, respectively, of matured oocytes nd 26.7 per cent and 34.4 per cent, respectively, of cleaved embryos. These findings show that the best IVM and IVF were obtained at lower concentrations of estradiol produced by co-cultured granulosa cells (supplementation with FCS + ECS: 10.3 ng/ml and FCS + MCS: 2.1 ng/ml), whereas the worst results in IVM and IVF occurred at higher concentrations of estradiol that were obtained with FCS (33.1 ng/ml) and FCS + PCS (19.9 ng/ml) supplementation. These data suggest an inhibitory effect of estradiol on resumption of oocyte meiosis in vitro

Colpocitologia do ciclo estral em gatas / Colpocytology of estrous cycle in cat

Foram submetidas à colpocitologia 10 gatas, sem raça definida, cedidas pelo Hospital Veterinário Governador Laudo Natel da FCAVJ-UNESP, as quais permaneceram em gatis individuais, recebendo raçäo balanceada e água à vontade. As fases do ciclo estral foram definidas pela identificaçäo e contagem das células epiteliais descamativas da vagina. Neste trabalho, observou-se que o número de células superficiais anucleadas predominaram nas fases de proestro e estro, ao passo que as células superficiais nucleadas foram identificadas em maior número no proestro. Já as células intermediárias e parabasais apresentaram-se em números mais expressivos no metaestro e anestro. Com relaçäo às células parabasais, houve predominância destas na fase de anestro

Alteraçöes produzidas a nível de testículo e sêmen de cäes submetidos à administraçäo de sulfato de vincristina / Resulting alterations at the level of testes and semen in dogs submitted to vincristine sulphate administration

Foram estudados 14 animais da espécie canina, sem raça definida, machos, adultos, com o objetivo de analisar, laboratorialmente, o sêmen e os aspectos histológicos dos testículos antes e após a administraçäo do sulfato de vincristina. Para tanto, os animais foram divididos em 2 grupos. No grupo I (8 animais), submeteu-se os animais à orquiectomia unilateral e um fragmento do testículo e epidídimo foram analisados histologicamente. No grupo II (6 animais), inicialmente, condicionou-se os animais para colheita de sêmen. Após obtençäo do material fecundante, este foi analisado laboratorialmente. No grupo I, todos os animais apresentaram degeneraçäo testicular em grau leve ou moderada. No grupo II, observaram-se alteraçöes espermáticas, principamente ao nível de peça intermediária e cauda. Entretanto, considerando que em termos de média, as características físicas e morfológicas do sêmen de cäes sofreram alteraçöes que säo reversíveis à utilizaçäo do sulfato de vincristina, como recurso terapêutico, pode ser instituído nesta espécie animal

Avancee du front epidemique de l'infection a VIH1 en Afrique centrale

Pour limiter l'expansion de l'infection a VIH une etude socio-spaciale s'avere necessaire. En Afrique Centrale; la prevalence presente une situation contrastee; d'un cote l'expansion est rapide et lente de l'autre. Malgre une relative accalmie dans les grandes metropoles; on note une nette expansion dans les centres urbains secondaires

Aneurisma traumatico da arteria cerebral media. Relato de caso. / Traumatic aneurysm of the middle cerebral artery: a case report

Os autores relatam o caso de paciente que sofreu traumatismo craniencefalico por projetil de arma de fogo, o qual atravessou a regiao orbitaria e originou um aneurisma na arteria cerebral media.O aneurisma aumentou de volume e rompeu no oitavo dia apos o trauma, tendo sido tratado com sutura microcirurgica da arteria

Atresia de esofago. Variedad no descrita previamente. / Esophageal atresia: type not previously described

La atresia de esofago es una malformacion del recien nacido, relativamente comun, ya que se presenta un caso por cada 3,000 nacidos vivos. Existen varias clasificaciones para agruparlas y estudiarlas, siendo la mas comunmente usada la del Dr. Gross, aunque en la actualidad se tiende a describir la malformacion desde el punto de vista anatomico; en la literatura mundial se han publicado variantes de estos grupos y se conocen hasta la fecha 72 casos diferentes. Sin embargo, en este informe presentamos una variedad no descrita en la literatura mundial que consistio en una paciente con atresia esofagica del tipo III, que ademas tenia otra fistula que partia del fundus gastrico a una duplicacion quistica esofagica intrapulmonar en el pulmon izquierdo, sin que pueda darse una explicacion logica basada en los conceptos etiologicos comunes para la atresia esofagica

Sindrome de Mallory-Weiss. Consideracoes sobre 27 casos. / Mallory-Weiss syndrome.Considerations on 27 cases

Foram estudados 27 pacientes com diagnostico endoscopico de sindrome de Mallory-Weiss, valorizando os seguintes parametros: idade e sexo, antecedentes, forma de apresentacao, manifestacoes clinicas, numero de dilaceracoes, lesoes associadas e evolucao. Vinte e tres pacientes eram do sexo masculino e 4 do feminino. A idade media foi de 46,5% anos.Somente em 8 foram encontrados antecedentes de aumento de pressao intra-abdominal: 7 com nauseas e vomitos e um com acesso de tosse.Dos 21 doentes controlados nesta serie, 9 eram etilistas cronicos e 3 apresentaram uma intoxicacao alcoolica aguda. Seis contavam uma ingestao recente de salicilatos. Em 22 pacientes a forma de apresentacao foi uma hemorragia digestiva, correspondendo a 4,9% do total de sangrantes nos quais foi realizado endoscopia digestiva alta. Em 22 casos a dilaceracao era unica, em 4 haviam duas dilaceracoes e em um, tres lesoes lineais. Com frequencia foram encontradas lesoes endoscopicas associada, sendo mais comum a hernia hiatal (37%). O tratamento foi medico em todos os casos, salvo em um, no qual foi necessario a cirurgia por uma perfuracao gastrica associada. Um paciente com sindrome de Mallory-Weiss e gastrite erosiva faleceu, sendo a gastrite erosiva a causa principal da hemorragia e do obito